报道基因
定义
报道基因是编码可检测的蛋白质或酶的基因，也就是说，其表达产物可以容易地被识别的基因。其编码序列与基因表达调控序列融合形成嵌合基因，或与其他目的基因融合，然后在调控序列的控制下表达，其表达产物可用于校准目的基因的表达调控，筛选获得转化子。
特性
作为报告基因，在遗传选择、筛选和检测中必须满足以下条件:
(1)已被克隆，全序列已确定；
(2)表达产物在受体细胞中不存在，即没有背景，转染细胞中没有类似的内源性表达产物；
(3)其表达产物可以定量测定。
app应用
在植物基因工程领域，已经使用的报告基因有:胭脂氨酸合酶基因(nos)、章鱼碱合酶基因(ocs)、新霉素磷酸转移酶基因(NPTⅱⅱ)、氯霉素乙酰转移酶基因(cat)、庆大霉素转移酶基因、葡萄糖苷酶基因、荧光素酶基因等。Nos和ocs基因是根癌土壤杆菌Ti质粒所特有的。当Ti质粒被修饰，用相应的根癌农杆菌转化植物时，如果外源基因转入植物，这两个报告基因可以在植物的根、茎、叶中表达，不受发育调控。检测时，可直接用转化子的提取液进行纸电泳，染色后在紫外光下可观察到荧光。Npt、cat和庆大霉素转移酶基因都是抗生素筛选基因，相关的酶可以修饰底物(磷酸化、乙酰化等。)，使这些抗生素失去对植物生长的抑制作用，从而使含有这些抗性基因的转化体能够在含有这些抗生素的筛选培养基上正常生长，或者可以通过提取转化体的液体、外源同位素标记和放射自显影进行筛选。
目前常用的一种报告基因是β-D-葡萄糖苷酶基因，它催化底物形成β-D-葡萄糖苷酸。它在植物中几乎没有背景，组织化学检测非常稳定，可以用光谱和荧光的方法检测。荧光素酶基因(luc)是1985年从北美萤火虫和磕头虫的cDNA文库中克隆出来的。该酶在ATP、Mg2++、O2和荧光素的存在下发出荧光，因此可以通过X射线胶片或特殊仪器直接检测整个或部分转基因植物。
在动物基因表达调控的研究中，报告基因也被广泛应用。常用的有氯霉素乙酰转移酶基因(cat)和β-半乳糖苷酶基因(LACZ) < X-gal为底物，蓝色菌落>:二氢叶酸还原酶基因、荧光素酶基因等。Cat基因作为报告基因，在检测时可以通过放射自显影观察到。荧光素酶基因作为报告基因，具有检测速度快、灵敏度比cat基因高30-1000倍、成本低、无需使用放射性同位素等优点。
优点，被广泛采用。
此外，在枣和酵母的双杂交系统中，反式作用因子的相互作用可以被报告子检测到。
研究蛋白质和蛋白质之间的相互作用。双杂交系统由报告基因的转录调控区、报告基因和一对可以相互作用的杂交反式作用因子组成。近年来，由上述杂交系统发展而来的单杂交系统技术，也是根据对报告基因表达的检测，筛选出未知因子与已知顺式作用元件结合的DNA。该技术广泛用于克隆含量较低、难以用生化手段纯化的反式作用因子。
Gus基因
Gus基因是β-葡萄糖醛酸酶基因。
基因产物是GUS蛋白，相当稳定，不易降解，而且是水解酶，所以测定方法简单。并且可以用市售底物原位显示酶的活性，产物可以用肉眼检测，非常方便。
Gus基因存在于一些细菌基因组中，如大肠杆菌，编码β-葡萄糖苷酶。β-葡萄糖醛酸酶是一种以β-葡萄糖醛酸苷为底物的水解酶，其反应产物可以通过多种方法检测。由于在大多数植物中没有检测到葡萄糖醛酸酶的背景活性，该基因被广泛用于基因调控的研究。根据gus基因检测所用底物的不同，可选择三种检测方法:组织化学法、分光光度法和荧光法(分光光度法是最受启发的方法)，其中组织化学法是最常用的方法。
5-溴-4-氯-3-吲哚-β-葡萄糖醛酸苷(X-Gluc)被用作反应底物。将待测材料浸泡在含有底物的缓冲溶液中。如果转化组织细胞了解gus基因并表达Gus，在合适的条件下，该酶可将X-Gluc水解成蓝色产物，即其初始产物氧化二聚化形成的靛蓝染料。它使具有Gus活性的部位或位点呈现蓝色，肉眼或显微镜下可见，并能在一定程度上根据染色深浅反映Gus活性。因此，通过这种方法可以观察特定器官、组织甚至单细胞中外源基因的表达。
GUS作为报告基因的利与弊
所用的报告基因是gus基因，它具有以下优点:
①通过简单的组织化学试验可以准确分析gus融合基因的time 空表达模式。
②GUS蛋白在转化的植物细胞中稳定存在，对高温和洗涤剂有一定的耐受性。
③检测方法简单，可用于定性和定量检测。以X-Gluc为底物，通过显色反应可以直接观察组织器官中gus基因的活性。以4-MUG为底物，GUS蛋白可催化其水解为4-MU和β-D葡萄糖醛酸。4-MU分子中的羟基解离后，被365nm的光激发，产生455nm的荧光，可以用荧光分光光度计定量检测。
④大多数植物组织中GUS活性的背景较低；
⑤检测只需要少量的植物组织。
但是，在实验过程中，发现了一些不足之处:
①染色不均匀。伤口处通常更深。用真空空处理材料可以提高GUS染料溶液的渗透性，但不能从根本上解决这个问题。实验中发现，将待染材料徒手切片后再进行染色，可以提高染色效果。
②不允许活染色。化学染色后，愈伤组织失去了继续培养的可能性，在检测茎和叶鞘时会对材料造成很大的损伤和损失。
③亚细胞定位是不可能的。如果需要亚细胞定位，gfp可以用作报告基因。
